蛋白纯化所用的层析柱,一种获得方法是直接买厂商的预装柱、无论亲和层析、离子交换还是分子筛、疏水等等,均有不同规格预装柱可供选择。

预装柱虽好,但有一个缺点:贵。举例GE的产品线来说,如果购买一个HiLoad的Superdex柱价格要在3万以上,而买个相同规格的XK空柱,然后再买相应体积的填料,可能一万五六就能搞定了。当然这不算自己动手DIY的时间与学习成本,但是学习其实不应该算作成本,亲自装一个柱子,对原理,填料性能会更加深入了解,也是一种增值/收获。最后说一句,可能预装柱贵不是它的缺点,而是穷才是我的缺点。

另外一种获得层析柱的方法,就是单独购买层析空柱和相应的填料了。这种方式与预装柱相比,就像组装一个台式机还是购买一个台式机,各有各的好。组装台式机,可以有不同的机箱,主板,CPU,GPU,内存,电源,显示器,甚至键盘鼠标的选择,想要高性能就各个顶配,如i9-9900K搭配TitanRTX显卡,2TSSD的骨灰级配置,摄影穷三代,单反毁一生恐怕都不如电脑发烧友能烧钱,毕竟,电脑硬件年年更新,比摄影器材速度快多了。

在蛋白纯化层析柱方面,可选择就没那么杂乱了,因为,AKTA系统是不能自己组装的,而且层析柱虽然拆解了会有20多个部件,也仍不及电子产品复杂。购买的时选择连摄影厂商都不如,更不能与PC硬件厂商相提并论。关于选择哪家,MP建议填料和空柱尽量只选择一家,因为:同一家的兼容性肯定最好,另外就是相关说明书及指导材料比较齐全容易搭配,最后一点,同一家的维护方便,如果某个部件坏了还能用在其他柱子上,变相节约资金。

鉴于MP主要使用GE家的,以下主要根据GE的产品进行介绍。如果读者朋友选择Biorad或者其他厂商的,也是可以的。

层析空柱选择

GE的空柱选择多样,从手工纯化(重力依赖)的Disposable空柱到工业级的Axichrom、Fineline等均有。MP主要介绍一下,实验室级别的XK、Tricorn、Hiscale三个系列。EmptyDisposable空柱就不推荐GE的了,性价比不高,随便买个国产的空柱就可。


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XK系列

XK系列为低压及中等压力的层析空柱(典型的XK16,最大耐压0.5MPa),为内外套管形式,方便对温度敏感的蛋白的纯化(外管水冷控制内管层析柱温度,类似电脑的水冷散热)。内管直径有16mm/26mm/50mm三种,各直径又有20cm到100cm之间的四种长度规格。至于价格,随便打听一下代理商,或者到GE官网看看美元或者欧元保价,你会觉得,现在的电脑真的好便宜……


XKColumn

Tricorn系列

Tricorn耐压能力显著上升,比XK高10倍以上,也高于下面的HiScale系列。这个耐高压的空柱适合分析级,或者超高纯度的应用,在官方说明书内,也是推荐装高性能的填料如Superdex,Source等HighFashion填料。Tricorn设计非常巧妙,安装也相对简单,如果一个一般货色的国产柱子也要卖1-2k的话,我宁愿花大几k买这么一个高级货。


Tricorncolumn

Hiscale系列

用于工艺开发及制备级应用,可以看做是XK的升级版,最大差异是耐压升级了,到2MPa,且拥有标配为2个的适配器,这在XK系列中只有一个,好处是装柱的时候灵活性更强:可以上下颠倒Inlet/outlet方向装柱,对调后压柱更均一,柱高更灵活。当然,你也可以给XK配两个适配器,前提是你得买N个XK空柱,才会有富余的适配器搞一搞“双头怪”。


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以上是简单介绍,更多详细参数请浏览网站:

装柱高度

关于装柱高度,不同目的显然有不同的高度需求。需要说明的一点是,柱高度是影响层析柱分辨率的因素之一,同时,柱高还与层析柱体积有关,所以针对不同的层析方法,会有不同的柱高要求。

对于制备级的层析柱:亲和与离子交换柱高度在10-20cm之间,最好不要太高,如果需要更大容量,可增加柱直径。对于凝胶过滤(分子筛),层析柱高度要在30cm以上,60-100cm应该是最佳区间。其他层析方法可进一步参考相关资料确定。

如果觉得阅读填料或者空柱说明太繁琐,那么,MP也有未经验证的建议,可以模仿预装柱的高度或者直径来DIY一个自己的层析柱,模仿总是相对安全的,某些手机厂商在十年前告诉兼职的MP过这“做事”的道理,当然,MP没用过那家的手机。